יום הכיפורים הוא יום סליחה וכפרה, יום שבו עבודת בית המקדש הייתה בשיאה וזהו היום היחיד בשנה שהותר לכוהן הגדול להיכנס לקודש הקודשים!

שבעת הפרקים הראשונים עוסקים בעבודת הכוהן הגדול ביום הכיפורים ופרק ח עוסק בענייני הצום.

מתוך עבודת הכוהן הגדול במסכת זו: הכנות הכוהן הגדול והלימוד שלו לקראת היום הגדול, חלוקת עבודת הקרבנות בין הכוהנים, הטבילות וההתקדשות בבית המקדש, הבגדים המיוחדים והקרבנות עם הוידויים המיוחדים על כל ישראל. בהמשך מתואר השעיר המשתלח לעזאזל, קריאת התורה ושאר העבודות.